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奧林巴斯細(xì)胞融合度檢查CKX-CCSW

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產(chǎn)品說(shuō)明: 通過(guò)使用OlympusCKX53倒置顯微鏡拍攝的圖像,奧林巴斯細(xì)胞融合度檢查CKX-CCSW自動(dòng)計(jì)算各種大小的培養(yǎng)容器中的細(xì)胞數(shù)量和融合百分比。 有*分析自體軟骨細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)...

詳細(xì)介紹

 通過(guò)使用OlympusCKX53倒置顯微鏡拍攝的圖像,奧林巴斯細(xì)胞融合度檢查CKX-CCSW自動(dòng)計(jì)算各種大小的培養(yǎng)容器中的細(xì)胞數(shù)量和融合百分比。 有*分析自體軟骨細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)特征 –融合度檢測(cè)軟件在細(xì)胞處理中的應(yīng)用– 背景 穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程和對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)特性的有x分析對(duì)于自體軟骨細(xì)胞植入和新的再s*物開發(fā)而言,是非常重要的兩個(gè)因素。這兩個(gè)因素均有與之相關(guān)的難題。實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定


通過(guò)使用OlympusCKX53倒置顯微鏡拍攝的圖像,奧林巴斯細(xì)胞融合度檢查CKX-CCSW自動(dòng)計(jì)算各種大小的培養(yǎng)容器中的細(xì)胞數(shù)量和融合百分比。

有*分析自體軟骨細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)特征
–融合度檢測(cè)軟件在細(xì)胞處理中的應(yīng)用–


背景
穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程和對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)特性的有x分析對(duì)于自體軟骨細(xì)胞植入和新的再s*物開發(fā)而言,是非常重要的兩個(gè)因素。這兩個(gè)因素均有與之相關(guān)的難題。實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的培養(yǎng)過(guò)程需要用以預(yù)測(cè)細(xì)胞傳代*佳時(shí)間的準(zhǔn)確、可重復(fù)的細(xì)胞融合信息。細(xì)胞生長(zhǎng)特性分析的挑戰(zhàn)性在于用戶希望在不必培養(yǎng)大量細(xì)胞的情況下獲取準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。奧林巴斯推出了CKX-CCSW軟件可以改s細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程并幫助解決這些問(wèn)題。
CKX-CCSW融合度檢測(cè)器軟件
該軟件可與顯微鏡和數(shù)碼相機(jī)結(jié)合使用對(duì)活細(xì)胞融合度進(jìn)行測(cè)量??焖?、簡(jiǎn)單的細(xì)胞計(jì)數(shù)程序以及高度準(zhǔn)確且可重復(fù)的數(shù)據(jù)可以實(shí)現(xiàn)恒定條件下穩(wěn)定且可預(yù)測(cè)的細(xì)胞培養(yǎng)。此外,無(wú)需破壞培養(yǎng)物即可測(cè)量培養(yǎng)物的數(shù)量和密度,從而將污染可能性降至*低。諸如倍增時(shí)間(DT)和群體倍增水平(PDL)等重要細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)據(jù)可在不干擾細(xì)胞的情況下以*效且無(wú)損的方式獲得。
CKX41顯微鏡、DP27數(shù)碼相機(jī)和CKX-CCSW軟件。

CKX-CCSW融合度檢測(cè)軟件的效果
1.解決穩(wěn)定自體軟骨細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程的難題
細(xì)胞傳代的時(shí)間通常依靠視覺(jué)進(jìn)行評(píng)估,而這可能導(dǎo)致人為錯(cuò)誤和造成傳代時(shí)間變化。CKX-CCSW軟件可提供培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)細(xì)胞的準(zhǔn)確融合信息,因此用戶能夠在合適的時(shí)間進(jìn)行細(xì)胞傳代。
2.解決有x獲取細(xì)胞生長(zhǎng)特征分析數(shù)據(jù)的難題
CKX-CCSW融合度檢測(cè)軟件能夠提供準(zhǔn)確、可重復(fù)的細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)據(jù),因此用戶可以安排細(xì)胞傳代時(shí)間,并減少培養(yǎng)過(guò)程中的庫(kù)存。

Appropriate Number of Cells for Passage
Fewer stocks needed when using the CCSW
準(zhǔn)確性驗(yàn)證
為了評(píng)估CKX-CCSW軟件的性能,可將軟件計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)量與根據(jù)熒光染色圖像計(jì)算的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行比較。聚焦顯微鏡是獲取準(zhǔn)確生長(zhǎng)曲線的重要因素,并且該軟件的聚焦指示器可產(chǎn)生準(zhǔn)確的結(jié)果。該軟件的準(zhǔn)確度估計(jì)為84–111%,表明該軟件能夠生成可靠的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。

相襯圖像
熒光染色的細(xì)胞核圖像

Accuracy Compared to Fluorescent Imaging (n=3)
在使用CKX-CCSW的情況下,即使細(xì)胞未染色,也可繪制與低密度到高密度細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)下進(jìn)行熒光觀察所獲得計(jì)數(shù)準(zhǔn)確度相當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)曲線。
結(jié)論
CKX41顯微鏡、DP27數(shù)碼顯微鏡相機(jī)和CKX-CCSW融合度檢測(cè)器軟件的結(jié)合讓用戶能夠在盡可能減少人為錯(cuò)誤的同時(shí)準(zhǔn)確估計(jì)細(xì)胞傳代的正確時(shí)間。該軟件無(wú)需更改細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境工作流程即可輕松獲取準(zhǔn)確、可重復(fù)的細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)據(jù)。
該項(xiàng)研究由日本醫(yī)學(xué)研究與發(fā)展局(AMED)和經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)省的“再s醫(yī)學(xué)產(chǎn)業(yè)化基本評(píng)估技術(shù)開發(fā)”計(jì)劃部分資助。樣品制備和圖像數(shù)據(jù)由OLYMPUS-RMS CORP提供。

 
量化衍生后iPS細(xì)胞集落的融合度
誘導(dǎo)多能干(iPS)細(xì)胞,由于其潛在應(yīng)用而繼續(xù)處于再s醫(yī)學(xué)和*物發(fā)現(xiàn)研究的*沿。針對(duì)研究目的維持、生長(zhǎng)和準(zhǔn)備iPS細(xì)胞的工作流程涉及許多過(guò)程。改進(jìn)此類流程以提*效率和減輕細(xì)胞死亡對(duì)于推進(jìn)所有干細(xì)胞相關(guān)研究均至關(guān)重要。干細(xì)胞研究雖然相對(duì)較新,但在很大程度上依賴于操作員的經(jīng)驗(yàn)和技能,這意味著人為錯(cuò)誤在集落功效中起著重要作用。指示iPS細(xì)胞融合度是優(yōu)化集落,分化和獲得可再現(xiàn)結(jié)果的有用工具。
iPS細(xì)胞研究示例


圖1.iPS細(xì)胞集落的圖像(左)和融合度測(cè)量結(jié)果(右)

解決方案
在iPS細(xì)胞培養(yǎng)維持過(guò)程中使用奧林巴斯 CKX53組織培養(yǎng)顯微鏡獲得多個(gè)圖像,讓CKX-CCSW軟件能夠提供準(zhǔn)確的融合度數(shù)據(jù)。在六天時(shí)間內(nèi),分別在6孔板的不同位置拍攝三張、六張和十張圖像。這些圖像被導(dǎo)入到CKX-CCSW軟件中,其中首先標(biāo)出了細(xì)胞和背景(圖1)。
從這里開始,在整個(gè)圖像中以藍(lán)色和綠色顯示細(xì)胞和背景,并計(jì)算所有圖像的融合度。在使用三張、六張和十張圖像時(shí),在第*天、第三天和第六天計(jì)算平均融合度和標(biāo)準(zhǔn)差。盡管所使用的圖像數(shù)量發(fā)生了顯著變化,但圖2顯示即使使用少量圖像也可以生成準(zhǔn)確的生長(zhǎng)曲線。

圖2.使用CKX-CCSW軟件記錄iPS細(xì)胞的集落變化、融合度


圖3.iPS細(xì)胞集落融合的生長(zhǎng)曲線(集落的3張圖像)
所使用的設(shè)備和軟件:奧林巴斯 CKX53顯微鏡,DP22相機(jī),CKX-CCSW軟件
物鏡:PLN2X(NA 0.06,WD 5.8 mm)觀察方法:明場(chǎng)
容器:6孔板
細(xì)胞:無(wú)滋y層的iPS細(xì)胞
由iPS PORTAL Inc.提供。
結(jié)論

與CKX53顯微鏡結(jié)合使用時(shí),奧林巴斯 CKX-CCSW軟件讓您能夠測(cè)量和記錄iPS細(xì)胞集落的融合度,無(wú)需從培養(yǎng)皿上刮擦iPS細(xì)胞集落,實(shí)現(xiàn)有x融合。本應(yīng)用指南以iPS細(xì)胞的維持培養(yǎng)過(guò)程為例,介紹了在使用100 mm培養(yǎng)皿和24孔板提取iPS細(xì)胞后,可在諸多維持培養(yǎng)過(guò)程中獲得無(wú)人為差異性的數(shù)據(jù)。其還可通過(guò)記錄和存儲(chǔ)定量數(shù)據(jù),支持高度可重復(fù)的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程。
 


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